[Verwendungszweck]
Dieses Kit dient zum Nachweis von Monkeypox Virus (MPV) in Serum- oder Läsionsexsudatproben unter Verwendung von Real
Zeit-PCR-Systeme.
[Bestandteile des Diagnosekits]
| Nein. |
Reagenzname |
Spezifikation & Menge |
| 50T |
200T |
| 1 |
MPV-PCR-Mix |
750 μl × 1 Röhrchen |
750 μl × 4 Röhrchen |
| 2 |
MPV-Enzymmischung |
200 μl × 1 Röhrchen |
200 μl × 4 Röhrchen |
| 3 |
Interne Kontrolle (IK) |
100 μl × 1 Röhrchen |
100 μl × 4 Röhrchen |
| 4 |
MPV-Negativkontrolle |
100 μl × 1 Röhrchen |
100 μl × 4 Röhrchen |
| 5 |
MPV-Positivkontrolle |
100 μl × 1 Röhrchen |
100 μl × 4 Röhrchen |
| 6 |
Anweisungen |
1 Portion |
1 Portion |
Notiz:1. Mischen oder tauschen Sie keine Komponenten aus verschiedenen Kit-Chargen aus.
2. Die MPV-Negativkontrolle ist steriles nukleasefreies Wasser und das Gen der internen Kontrolle (IC), und die MPV-Positivkontrolle ist DNA in vitro, die Zielgene und das Gen der internen Kontrolle (IC) enthält.
[Prüfen Methode]
1. Reagens Vorbereitung(durchgeführt bei „Reagens Vorbereitung Region“)
1.1 Nehmen Sie alle Komponenten aus dem Diagnosekit und legen Sie sie auf Raumtemperatur.Lassen Sie die Reagenzien bei Raumtemperatur äquilibrieren und mischen Sie sie dann jeweils für die spätere Verwendung.
1.2 Je nach Menge der Testproben, MPV-Positivkontrolle, MPV-Negativkontrolle und internen Kontrolle (IC),
Pipettieren Sie die entsprechende Menge MPV PCR Mix und MPV Enzyme Mix (MPV PCR Mix 15 μl/Test + MPV Enzyme Mix 4 μl/Test + Interne Kontrolle (IC) 1 μl/Test), mischen Sie sie gründlich, um einen PCR-Mastermix herzustellen, und zentrifugieren Sie ihn sofort für spätere Verwendung.
| Reagenzname |
1 Probe |
10 Probe |
25 Probe |
50 Probe |
100 Probe |
200 Probe |
| MPV-PCR-Mix (μl) |
fünfzehn |
150 |
375 |
750 |
1500 |
3000 |
| MPV-Enzymmischung (μl) |
4 |
40 |
100 |
200 |
400 |
800 |
| Interne Kontrolle (IK) |
1 |
10 |
25 |
50 |
100 |
200 |
| PCR-Mastermix |
20 |
200 |
500 |
1000 |
2000 |
4000 |
| Hinweis: Die obige Konfiguration dient nur zu Ihrer Information und um ein ausreichendes Volumen des PCR-Mastermix sicherzustellen, ist möglicherweise mehr Volumen für das eigentliche Pipettieren erforderlich. |
1.3 Übertragen Sie die oben vorbereiteten Reagenzien zur späteren Verwendung in den „Probenverarbeitungsbereich“.
2. wird bearbeitet und Wird geladen von Exemplare (durchgeführt bei „Probe wird bearbeitet Region“)
2.1 Dieses Diagnosekit enthält kein virales RNA- und DNA-Extraktionskit.Es wird empfohlen, das von Changsha Renji Medical Equipment Co., Ltd. hergestellte virale RNA- und DNA-Extraktionskit zu verwenden, um virale DNA zu extrahieren.Der spezifische Betrieb entspricht seinen Anweisungen.
2.2 Geben Sie 20 μl PCR-Mastermix in das PCR-Reaktionsröhrchen mit 5 μl der oben verarbeiteten Probe, MPV-Positivkontrolle und MPV-Negativkontrolle und verschließen Sie das Röhrchen.Führen Sie einen quantitativen Fluoreszenz-PCR-Nachweis auf einem Fluoreszenz-PCR-Gerät durch.
3.PCR Verstärkung (durchgeführt bei „Nuklein Säureverstärkung Bereich“)
3.1 Stellen Sie die PCR-Reaktionsröhrchen in die Probenvertiefungen der Amplifikationsausrüstung.Richten Sie die MPV-Positivkontrolle, die MPV-Negativkontrolle und die zu testenden Proben in der entsprechenden Reihenfolge ein und geben Sie den Probennamen ein.
3.2 Zyklusparameter gemäß folgender Tabelle für die PCR-Amplifikation einstellen.
| Schritte |
Reaktionsschritt |
Temperatur |
Zeit |
Fahrräder |
| 1 |
UNG-Enzymreaktion |
50℃ |
2 Minuten |
1 |
| 2 |
TAQ-Enzymreaktion |
95℃ |
3 Minuten |
1 |
| 3 |
Verformung |
95℃ |
10s |
40 |
| Glühen |
55℃ |
30er* |
Hinweis: 1) Die Fluoreszenzsammlung ist auf „Schritt 3: 55 °C, 30 s“ eingestellt.Auswahl der Detektionskanäle: FAM und Cy5, wobei der FAM-Kanal das Zielgen ist, der Cy5-Kanal das Gen der internen Kontrolle (IC) ist und das Reaktionssystem auf 25 μl eingestellt ist.
2) Fluoreszenz-PCR-Instrumente der ABI-Serie wählen keine ROX-Kalibrierung und wählen für die Löschgruppe „Keine“.
Ihre Nachricht muss zwischen 20 und 3.000 Zeichen enthalten!
